血流紊亂所引起的剪切應力降低，將會損害內皮完整性，促進血管炎癥病變的發展。今天，和大家分享的實驗是金屬蛋白酶ADAM15在剪切應力作用下上調，促進內皮細胞存活。

小編分享的內容主要來自國外的一篇名為《The metalloproteinase ADAM15 is upregulated by shear stress and promotes survival of endothelial cells》的研究報告。

ADAM家族的金屬蛋白酶已參與細胞存活和炎癥反應的調節。當內皮細胞受到生理剪切應力時，ADAM家族內ADAM15mRNA最顯著上調(4倍)。這種誘導作用在靜脈、動脈和微血管內皮細胞中得到證實，并與ADAM15蛋白在細胞裂解液中(5.6倍)和細胞表面(3.1倍)的表達增加有關。ADAM15啟動子含有轉錄因子KLF2的多個一致位點，也受到剪切應力的上調。

研究介紹

內皮細胞不斷暴露于血流，會導致內皮表面層流剪切應力。

內皮表面的剪切應力在大動脈和小動脈或靜脈中明顯不同。

內皮細胞對血管系統中流動條件減少的病理反應與轉錄變化有關。

解整合素和ADAM（金屬蛋白酶）家族成員與各種內皮細胞功能有關。

實驗方法

慢病毒轉導：使用MISSION?shRNA進行系統短發夾RNA的慢性病毒轉導。對于ADAM15敲低。并對pLKO.1puro質粒進行編號。

流式細胞分析：以添加0.2% BSA的PBS作為檢測緩沖液染色過程的步驟在4°C下進行。HUVECs是通過小鼠孵育分析ADAM15的表達抗ADAM15單克隆抗體(5 μg/ml)與apc偶聯的抗小鼠抗體(1:200)。

細胞凋亡測定：10ng /ml TNF和10ng /ml TNF均可誘導細胞凋亡，用無血清培養基去除生長因子培養24小時，然后用三種不同的方法確定Tosis。對最終點分析，對于live-cell成像后，細胞用fitc標記的annexin V在Hanks中孵育緩沖鹽溶液(HBSS)， 30分鐘以綠色熒光區域的比例確定相對凋亡和總的細胞面積在至少8個圖像為每一條件使用。

總結

1.剪切應力上調內皮ADAM15表達。

人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)在靜態或者不同流動條件下培養。在流動條件下的內皮細胞獲得了細長的形狀并在流動方向上對齊。

2.流體剪切應力引起的ADAM15上調涉及KLF2。

轉錄因子KLF2受剪應力誘導，負責調控大部分剪切應力敏感基因，實驗證實，實驗設置中，KLF2mRNA的表達是通過剪切應力調控的。

3.ADAM15缺失時炎癥基因誘導和凋亡增強。

原文連接：http://sci-hub.ren//31271758/

小編旨在分享、學習、交流生物科學等領域的研究進展。如有侵權或引文不當請聯系小編修正。如有任何的想法以及建議，歡迎聯系小編。關注公眾號“Naturethink”了解更多流體剪切力細胞體外培養知識！